超微量分光光度計(jì)在要求較高的分析測(cè)試工作中，紫外可見分光光度計(jì)的雜散光應(yīng)優(yōu)于0.05%，這樣可保證儀器有較寬的線性動(dòng)態(tài)范圍。雜散光通常在紫外區(qū)。實(shí)際測(cè)試時(shí)，應(yīng)檢測(cè)整個(gè)光譜區(qū)的兩個(gè)端點(diǎn)的雜散光。紫外可見分光光度計(jì)的光度噪聲與掃描速度有很大關(guān)系。一般來(lái)講，掃描速度快的紫外可見分光光度計(jì)的噪聲也大。大屏幕紫外分光光度計(jì)的基線平直度是指每個(gè)波長(zhǎng)上的光速噪聲。測(cè)基線平直度時(shí)，掃描速度用慢速。
超微量分光光度計(jì)安裝環(huán)境的要求有：
?。?）實(shí)驗(yàn)室環(huán)境要求：主要包括環(huán)境溫濕度、環(huán)境潔凈狀況、光及磁場(chǎng)干擾等。具體要求如下：
①環(huán)境溫濕度 儀器應(yīng)安放在干燥的房間內(nèi)，使用溫度為5～35℃，相對(duì)濕度不超過(guò)85%，應(yīng)控制在45%～65%，無(wú)冷凝。如有條件，應(yīng)配備去濕機(jī)（空調(diào)）、濕度計(jì)等，在相對(duì)濕度較大的地區(qū)應(yīng)在儀器周圍放一些干燥劑。
②無(wú)強(qiáng)光干擾及磁場(chǎng)干擾 室內(nèi)照明不宜太強(qiáng)，且避免直射日光的照射。儀器應(yīng)盡量遠(yuǎn)離高強(qiáng)度的磁場(chǎng)、電場(chǎng)及發(fā)生高頻波的電器設(shè)備，防電磁干擾。
?、鄯乐垢g性氣體 避免在有硫化氫、：二氧化硫以及各種酸霧等腐蝕性氣體的場(chǎng)所使用，以免侵蝕儀器的約部件。
在使用超微量分光光度計(jì)時(shí)，需要注意一些使用的維護(hù)措施：
1、使用的吸收池必須潔凈，并注意配對(duì)使用。量瓶、移液吸管均應(yīng)校正、洗凈后使用。
2、取吸收池時(shí)，手指應(yīng)拿毛玻璃面的兩側(cè)，裝盛樣品以池體的4/5為度，使用揮發(fā)性溶液時(shí)應(yīng)加蓋，透光面要用擦鏡紙由上而下擦拭干凈，檢視應(yīng)無(wú)溶劑殘留。吸收池放入樣品室時(shí)應(yīng)注意方向相同。用后用溶劑或水沖洗干凈，晾干防塵保存。
3、供試品溶液濃度除各該品種已有注明外，其吸收度以在0.3～0.7之間為宜。
4、測(cè)定時(shí)除另有規(guī)定外，應(yīng)以配制供試品溶液的同批溶劑為空白對(duì)照，采用1cm石英吸收池，在規(guī)定的吸收峰±2nm以內(nèi)，測(cè)幾個(gè)點(diǎn)的吸收度或由儀器在規(guī)定的波長(zhǎng)附近自動(dòng)掃描測(cè)定，以核對(duì)供試品的吸收峰位置是否正確，并以吸收度zui大的波長(zhǎng)作為測(cè)定波長(zhǎng)，除另有規(guī)定外吸收度zui大波長(zhǎng)應(yīng)在該品種項(xiàng)下規(guī)定的測(cè)定波長(zhǎng)±2nm以內(nèi)。
5、選用儀器的狹縫寬度應(yīng)小于供試品吸收帶的半寬度，否則測(cè)得的吸收度值會(huì)偏低，狹縫寬度的選擇應(yīng)以減少狹縫寬度時(shí)供試品的吸收度不再增加為準(zhǔn)，對(duì)于大部分被測(cè)品種，可以使用2nm縫寬。
超微量分光光度計(jì)為了測(cè)量不同方向上的光強(qiáng)，上海光度計(jì)將燈具安裝在分布光度計(jì)上，以便于將其定位在規(guī)定的角度。分布光度計(jì)通常由一個(gè)用以支撐和定位燈具或光源以及光度探頭的機(jī)械裝置，連同一些獲取和處理數(shù)據(jù)的輔助設(shè)備組成。
上海光度計(jì)基本上可以分為三種：
一種使燈具繞兩根相互垂直的軸旋轉(zhuǎn)，且兩根軸的交點(diǎn)是分布光度計(jì)光度中心的分布光度計(jì)這類分布光度計(jì)通常使用一個(gè)單獨(dú)的且安裝在離光度中心距離足夠遠(yuǎn)的光度計(jì)探頭。
一種分布光度計(jì)，燈具僅繞一根軸旋轉(zhuǎn)，燈具與光度探頭的相對(duì)運(yùn)動(dòng)，光度探頭在穿過(guò)分布光度計(jì)的光度中心面內(nèi)相對(duì)于*根軸的角度并跨越*根軸，繞第二根軸作第二種旋轉(zhuǎn)。
一種燈具*不動(dòng)的分布光度計(jì)。光度探頭繞兩根穿過(guò)分布光度計(jì)光度中心且相互垂直的軸旋轉(zhuǎn)。
超微量分光光度計(jì)的使用方法
1.選擇測(cè)定波長(zhǎng)
2.接通電源開關(guān)，把黑體放在*格并置于光路中，合上樣品室暗箱蓋，模式處于T 狀態(tài)下預(yù)熱20分鐘；（斷開光路）
3.將裝有參比溶液和被測(cè)樣品的比色皿依次置于樣品室中（參比置于第二個(gè)格）。
4.調(diào)0%T：將黑體置于光路中，T 應(yīng)為0%，否則調(diào)“0%T”按鍵使顯示為000。
5.調(diào)Ｔ＝100％：將參比溶液置于光路，T 應(yīng)為，否則調(diào)節(jié)“100％Ｔ”按鍵，使指針指在Ｔ＝100％。（注意：不測(cè)定溶液吸光度時(shí)，應(yīng)把黑體置于光路，防止光照長(zhǎng)時(shí)間照射檢測(cè)器）。
6. 樣品的測(cè)定：把模式設(shè)置為A ，將樣品液依次處于光路中，分別記下被測(cè)樣品的吸光度。
7.測(cè)量完畢，及時(shí)取出比色皿，用水洗干凈后倒置于濾紙上晾干，并將比色皿座架及暗箱用軟紙擦凈，關(guān)掉電源，儀器恢復(fù)至初始狀態(tài)。
8.填寫儀器使用記錄表
大屏幕紫外分光光度計(jì)由于各種物質(zhì)具有各自不同的分子、原子和不同的分子空間結(jié)構(gòu)，其吸收光能量的情況也就不會(huì)相同，因此，每種物質(zhì)就有其*的、固定的吸收光譜曲線，UV-3802準(zhǔn)雙光束紫外可見分光光度計(jì)可根據(jù)吸收光譜上的某些特征波長(zhǎng)處的吸光度的高低判別或測(cè)定該物質(zhì)的含量。
物質(zhì)的吸收光譜本質(zhì)上就是物質(zhì)中的分子和原子吸收了入射光中的某些特定波長(zhǎng)的光能量，相應(yīng)地發(fā)生了分子振動(dòng)能級(jí)躍遷和電子能級(jí)躍遷的結(jié)果。由于各種物質(zhì)具有各自不同的分子、原子和不同的分子空間結(jié)構(gòu)，其吸收光能量的情況也就不會(huì)相同，因此，每種物質(zhì)就有其*的、固定的吸收光譜曲線，可根據(jù)吸收光譜上的某些特征波長(zhǎng)處的吸光度的高低判別或 測(cè)定該物質(zhì)的含量，這就是分光光度定性和定量分析的基礎(chǔ)。分光光度分析就是根據(jù)物質(zhì)的吸 收光譜研究物質(zhì)的成分、結(jié)構(gòu)和物質(zhì)間相互作用的有效手段。
超微量分光光度計(jì)的使用經(jīng)驗(yàn)
1、幾乎所有的光譜分析儀器都是依據(jù)的朗伯-比耳定律。
2、很多藥品要求相對(duì)誤差在1%以內(nèi)。
3、若石英比色皿QC的配對(duì)誤差為0.1%T，則給使用者帶來(lái)的分析誤差為0.5%。若QC的配對(duì)誤差為0.5%，則分析誤差為3%。
4、大屏幕紫外分光光度計(jì)分析測(cè)試時(shí)，注進(jìn)比色皿的溶液不要太滿，一般到比色皿高度的2/3即可。
5、一般的光電檢測(cè)器如硅光電池、光電管、光電倍增管有疲憊效應(yīng)，應(yīng)避免長(zhǎng)時(shí)間照射、預(yù)熱時(shí)，打開樣品室蓋，防止光電檢測(cè)器受光疲憊。
6、光譜帶寬以nm計(jì)，狹縫寬度以mm計(jì)。
7、波長(zhǎng)正確度在某種程度上，決定光度正確度。
8、噪聲限制紫外可見分光光度計(jì)對(duì)樣品分析濃度的下限，并直接影響儀器的信噪比。雜散光直接限制被分析測(cè)試樣品濃度的上限。
9、雜散光對(duì)參比光束和樣品光束的影響是相同的。
10、在要求較高的分析測(cè)試工作中，紫外可見分光光度計(jì)的雜散光應(yīng)優(yōu)于0.05%，這樣可保證儀器有較寬的線性動(dòng)態(tài)范圍。
11、雜散光通常在紫外區(qū)。實(shí)際測(cè)試時(shí)，應(yīng)檢測(cè)整個(gè)光譜區(qū)的兩個(gè)端點(diǎn)的雜散光。
12、紫外可見分光光度計(jì)的光度噪聲與掃描速度有很大關(guān)系。一般來(lái)講，掃描速度快的紫外可見分光光度計(jì)的噪聲也大。
13、大屏幕紫外分光光度計(jì)的基線平直度是指每個(gè)波長(zhǎng)上的光速噪聲。測(cè)基線平直度時(shí)，掃描速度用慢速。
14、紫外可見分光光度計(jì)的線性動(dòng)態(tài)范圍取決于儀器的雜散光與噪聲。
15、為了得到更好的光度正確度，在分析過(guò)程中，特別要留意選擇試樣的zui大吸收峰處的波長(zhǎng)作為測(cè)試波長(zhǎng)。
16、選擇光譜帶寬的原則是，在一定的實(shí)驗(yàn)條件下，測(cè)試吸光度隨光譜帶寬的變換，以獲得zui大吸光度值的光譜帶寬作為欲選擇的光譜帶寬。
17、判定被測(cè)試樣是否有光解現(xiàn)象，首先要看測(cè)試數(shù)據(jù)的變化規(guī)律，對(duì)同一個(gè)試樣多次丈量，看其吸光度值是否都是向同一個(gè)方向變化，假如是，就可能有光解現(xiàn)象。
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