1.紫外分光光度計工作原理
物質(zhì)的吸收光譜本質(zhì)上就是物質(zhì)中的分子和原子吸收了入射光中的某些特定波長的光能量，相應(yīng)地發(fā)生了分子振動能級躍遷和電子能級躍遷的結(jié)果。由于各種物質(zhì)具有各自不同的分子、原子和不同的分子空間結(jié)構(gòu)，其吸收光能量的情況也就不會相同。因此，每種物質(zhì)就有其*的、固定的吸收光譜曲線，可根據(jù)吸收光譜上的某些特征波長處的吸光度的高低判別或測定該物質(zhì)的含量，這就是分光光度定性和定量分析的基礎(chǔ)。分光光度分析就是根據(jù)物質(zhì)的吸收光譜研究物質(zhì)的成分、結(jié)構(gòu)和物質(zhì)間相互作用的有效手段。
又因為許多物質(zhì)在紫外-可見光區(qū)有特征吸收峰，所以可用紫外分光光度法對這些物質(zhì)分別進行測定(定量分析和定性分析)。紫外分光光度法使用基于朗伯-比耳定律。
朗伯-比耳定律(Lambert-Beer)是光吸收的基本定律，俗稱光吸收定律，是分光光度法定量分析的依據(jù)和基礎(chǔ)。當(dāng)入射光波長一定時，溶液的吸光度A是吸光物質(zhì)的濃度C及吸收介質(zhì)厚度l(吸收光程)的函數(shù)。
首先確定實驗條件，并在此條件下測得標準物質(zhì)的吸收峰以及其對應(yīng)波長值(同時可獲得該物質(zhì)的大吸收波長)；再在選定的波長范圍內(nèi)(或大波長值處)，分別以(不同濃度)標準溶液的吸光度和溶液濃度為橫、縱坐標繪出化合物溶液的標準曲線得到其所對應(yīng)的數(shù)學(xué)方程；接著在相同實驗條件下配制待測溶液，測得待測溶液的吸光度，后用已獲得的標準曲線方程求出待測溶液中所需測定的化合物的含量。
凡具有芳香環(huán)或共軛雙鍵結(jié)構(gòu)的有機化合物，根據(jù)在特定吸收波長處所測得的吸收度，可用于藥品的鑒別、純度檢查及含量測定。
2.常見類型
紫外可見分光光度計
技術(shù)指標
波長范圍：190-900nm
光譜帶寬：1.0
波長準確度：±0.1nm(D2656.1nm)，±0.3nm全區(qū)域
波長重復(fù)性：≤0.1nm
雜散光：≤0.03%T
光度準確度：±0.2%T
光度重復(fù)性：0.1%T
穩(wěn)定性：0.0004A/h(500nm處)
基線平直度：±0.001A
數(shù)據(jù)輸出：USB接口
打印輸出：并行口
光度顯示范圍：0-200%T、-4-4A、0-9999C(0-9999F)
顯示系統(tǒng)：320*240位點陣高亮背光大屏幕LCD液晶顯示器
軟件：標配
燈源：進口氘燈、鎢燈
接收器：進口硅光二極管
外形尺寸：460*380*220mm
重量：20kg
儀器特點
1、320*240位點陣高質(zhì)量大屏幕液晶顯示器，顯示清晰，信息完備，充分考慮人性化設(shè)計
2、強大的數(shù)據(jù)處理功能，使實驗結(jié)果能得到充分的應(yīng)用，使用戶編輯更為簡單快捷
3、主要元件采用進口配置，使精度更高、速度更快、可靠性更強、兼容性更廣、自動化程度更高
4、豐富的應(yīng)用功能，使用戶隨心所欲，應(yīng)用更靈活、開放，使分光光度計的應(yīng)用領(lǐng)域得到了極大的拓展
5、高自動化程度，使維護方便、操作簡便、效率更高
大屏幕液晶LCD主機顯示功能
光度測量：選定波長下吸光度、透過率、濃度的測試
定量測量：標準曲線法、系數(shù)法、單波長法、雙波長法、多波長法
光譜掃描：多樣品進行全波段掃描，找出大吸收峰值
動力學(xué)測試：選定波長下測試樣品濃度隨時間的變化趨勢
多波長測試：自由選定多個波長，自動測出樣品在多個波長下的吸光度和透過率值
DNA/蛋白質(zhì)測試：測試DNA/蛋白質(zhì)的濃度和比率
自動功能：波長誤差的自動修復(fù)、濾光片切換的自動定位、氘燈和鎢燈的自動切換
其他功能：光譜導(dǎo)數(shù)、光譜平滑、數(shù)據(jù)導(dǎo)出、燈源自動控制、支持自動樣品池架及其它附件、配有數(shù)據(jù)口可實現(xiàn)聯(lián)機操作、數(shù)據(jù)存儲和調(diào)用、斷電保持和系統(tǒng)應(yīng)用功能豐富的掃描軟件功能：光度分析、定量分析、光譜分析、動力學(xué)分析、多波長測試、DNA/蛋白質(zhì)測試、系統(tǒng)應(yīng)用。
3.校正方法
紫外分光光度計的校正方法：分光光度法的重要的一個物理化學(xué)量是吸光度。為了獲得準確的研究結(jié)果，準確測得樣品溶液的吸光度是非常重要的。一般，分析結(jié)果的不可靠性與偶然誤差和系統(tǒng)誤差有關(guān)。偶然誤差影響測量的精密度，可通過足夠數(shù)量測量的統(tǒng)計處理來減少;系統(tǒng)誤差影響測量結(jié)果的準確度，可在大體相同實驗條件下，用比較一種物質(zhì)的準確測量結(jié)果，使系統(tǒng)誤差統(tǒng)一起來。而分光光度計的系統(tǒng)誤差(波長校正、分光光度計的慢散光、放大器的線性響應(yīng)、暗電流和比色皿的光程)和操作誤差(溫度改變、儀器讀數(shù)、操作者的改變、使用物質(zhì)的純度、稱量和濃度、pH)對測量吸光度的影響是可以檢查和校正的。關(guān)于操作誤差，多數(shù)情況下，通過嚴格按操作程序測量、儀器調(diào)零、準確稱量等來控制或減少這種誤差的產(chǎn)生。關(guān)于儀器的系統(tǒng)誤差，可通過對分光光度計的定期校正來克服，若所需準確度很高的測量，則必須天天校正。
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